チューブリンの重合アッセイ  

試薬の準備

PEM buffer（pH 6.9）の調製
（0.1M PIPES， 1 mM EGTA（Caｲｵﾝの除去），1mM MgSO4（重合に必須）， 1M　NaOH　約15mL（pH調整用））
300 mLメスシリンダーにPIPESを3.023g、EGTAを39.2g、MgSO4を14.8mg入れ、50mLほどのIEWに溶かし、撹拌しながら1M　NaOH水溶液でpH 6.9に調製した。この溶液を、IEWで100mLにメスアップした。
Tubulin / PEM buffer溶液の調製
チューブリン １mgをPEM buffer １mLで溶かし、150μLずつエッペンに分注した。保存は-80℃で行った。
20mM　GTPの調製
GTPをIEWで溶かし、100μLずつエッペンに分注した。保存は-20℃で行った。

各試薬の調製
○ 7.5×10−１mM　Paclitaxel / DMSO溶液 Paclitaxelを gとり、凍結用チューブにいれ、DMSO　mLで溶かした。
○ 7.5×10−１mM　Bmcmoc-Paclitaxel / DMSO溶液（UV照射前） Bmcmoc-Paclitaxelを gとり、凍結用チューブにいれ、DMSO　mLで溶かした。
○ 7.5×10−１mM　Bmcmoc-Paclitaxel / DMSO溶液（UV照射後） 上述の7.5×10−１mM　Bmcmoc-Paclitaxel / DMSO溶液（UV照射前）を100μLとり、日電理科硝子（株）製のミニバイアルにいれた。光分解に用いたランプはRayonet Photochemical Reactor 3500Å×2本で、クランプで固定し、光照射を20、40、60秒で行った。

チューブリン の重合アッセイ （まだ途中。川村さんに聞かねば）

まず、GTPをセル（UV-Cuvette micro）に入れ、次に各サンプルを入れる。その後、室温（２１℃）の150μ Lずつ分注しておいたTubulin / PEM buffer溶液をいれ、恒温セルホルダーによって37℃に保たれた分光光度計でAbs.を時間変化でトレースした。その様子は縦軸にAbs.、横軸に時間（min.）をとり、プロットした。光分解の様子はHPLCで確認した。

参考文献