HPLC (Agilent 1100 シリーズ)　簡易操作マニュアル

準備・条件設定など

茶色のボトル：有機溶媒 （アセトニトリルまたはメタノール）
無色のボトル：水系溶媒（蒸留水または緩衝液）
溶媒はHPLC用を3 L単位で購入し使っている。ミリポアのメンブレンフィルター（45 um）を通して吸引ろ過後、10分程度の超音波照射で脱気する。オンラインデガッサが付いているが、超音波で脱気した方がいいと思う。ろ過びんを超音波洗浄器に浸けて、吸引しながら脱気するのがもっともよい。メンブレンフィルターは、メタノールと水のろ過にはセルロースアセテート（安い）が使える。アセトニトリルのろ過にはPTFEを使う。セルロースアセテートでは溶けてしまうので。フィルターは何回か使えるが、目詰まりしてくると、ろ過のスピードが極端に遅くなるので交換する。
流速：1 mL〜5 mL/ minまで
カラム圧力：400 kgf/ cm3まで（装置のリミットは400 kgfに設定するが、実際には150 kgfを超えたらカラムの目詰まりを疑う）
カラム温度設定：80℃〜室温-10℃まで
フォトダイオードアレイ検出器（UV）：180〜975 nm
蛍光検出器：200〜700 nmの励起光、280〜900 nmの発光

電源入れ

CRT、プリンタ（電源）
ハード（電源）
NTログオン（ユーザー名：chemist、パスワード：bhc）
CAG Bootp Serverﾓの立ち上げ（閉じてはいけない）
各HPLCモジュール（電源）
イニシャライズの確認
装置１オンラインﾓをダブルクリック
ケミステーションの起動

分析準備

１：溶媒の調製後、フィルターでろ過
２：ポンプヘッド内の気泡抜き（長時間オフになっていたとき）
３：ランプ点灯
４：ヒーターブロックの温度コントロールをオン
５：カラムが設定温度になったら、ポンプをオン
６：送液の圧、DAD、FLDが安定後（ONにしてから約30分後）、分析がで きるようになる。
　 以上（参考：ケミステーション基本操作マニュアル 3-2）

分析（１サンプルのみ）

１：サンプル情報（サンプル名、測定条件（溶媒）、サンプル濃度など）
２：ベースライン、システム圧力が安定している事を確認
３：メソッドラン　(F5)をクリック
４：サンプルをインジェクト
５：分析の終了時に、ラン／注入／シーケンス中止　or　終了　(F8)をクリック →レポート報告される（c\hpchem\1\dataの中に保存される）
６：次のサンプル情報
７：F5
８：サンプルをインジェクト
９：F8 　　→レポート報告される
　 ＊ 6〜9をくり返す （注）：蛍光ランプは１回の分析ごとに消灯される。しかし、サンプルをインジェクトすると、自動的に点灯される。

データ解析（参考：ケミステーション基本操作マニュアル 6-1〜16）

１：データ読み取り ２：積分 ３：定量（検量線とか）

電源切る

ケミステーションを終了
CAG Bootp Server をOFF
NTの終了
ハードとCRTの電源を切る
各HPLCの電源を切る

メソッドの編集

メソッド　→　新規メソッド　→　メソッド全体の編集
　　　 装置の設定
　　　　 ・メソッド情報
　　　　 ・ポンプ設定（流量、溶媒の%、グラジエント）
　　　　 ・カラムコンパートメントの設定（カラム温度）
　　　　 ・DADの設定（UV-visの波長）
　　　　 ・FLDの設定（蛍光の波長）
　　　 データ解析関連
　　　　 ・シグナル詳細（積分、レポート報告したいシグナルを設定）
　　　　 ・積分イベント（積分の仕方を変える）
　　　　 ・レポート条件（レポートの出力先（プリンタとか）などを決める）
　　　　 ・モニターカーブ（分析時の状態を重ね書きする）
　　　　 ・ランタイムチェックリスト（データの取り込みや解析などを行うか決める）
　 →　メソッドの保存

（関連）

メソッド　→　「メソッド全体編集」において、「積分イベント設定」で、積分する際の積分限界などの設定を行う。
・Slope: Peak width:保持時間がある幅以下のものは積分しないようにする設定。
・Area Reject:設定した数値以下の積分は読み取れないようにする。よっ て、手動積分で積分できなかったら、この数値を下げること で読めるようになる。
・Height Reject:設定した数値以下のピーク高以下のものの積分は行わない ような設定。
　 以上（参考：ケミステーション基本操作マニュアル 2-1〜38）

（付け足し）

測定中にデータ解析を行うときは、オンラインとオフラインの両方を立 ち上げて、オンラインでは測定を行い、オフラインでは解析を行う。
積分の解析画面（図１を押す） 図２：拡大　図３：消去　図４：手動積分、図５：ベースラインを引いて、ベースラインの上にある面 積と下にある面積を同時に積分、図６：積分面積を分割する、図７：積分消去

重ね書きの時（図８を押す）
１：重ね書きしたいシグナルを表示するために、図９を用いてデータを開く。
２：重ね書きに必要のないシグナルは、図１０で消す。
３：図１１を押す事で、重ね書きができる。
４：シグナル重ね書きオプション 　
　シグナル間のタイムオフセット→シグナルを横にずらす。 　
　シグナル間のレスポンスオフセット→シグナルを縦にずらす。
５：重ね書きしたデータの編集。 　図１２：文字を書く、図１３：文字を動かす、図１４：図１５を消した り表示したりできる、図１６：重ね書きデータのコピー
６：コピーしたデータは、ペイントで編集する。
７：編集したデータは、FDでの保存のみとなるので、保存形式を「白黒」にしなければ、重たくてFDに入らない。

スペクトル解析（参考：ケミステーション基本操作マニュアル 7-1〜28）
１：スペクトルオプション
２：スペクトルの表示、印刷
３：純度チェック
４：等高線表示
５：三次元表示
６：スペクトルライブラリサーチ

参考文献